蝎毒镇痛有效成分的分离纯化及其镇痛作用的研究

2019-05-23 19:35:40 发布者: 浏览: 23 次 关键词:
摘要: 对蝎毒镇痛有效成分进行分离纯化,筛选出具有镇痛作用的组分。方法:(1)分离条件的选择:应用Superdex 75凝胶层析预装柱,对样品的不同处理方法、洗脱流速、不同洗脱液以及样品浓度等分离条件进行考察,得到最佳条件。(2)各组分分子量范围及药理作用评价:采用SDS-PAGE电泳鉴定各组分纯度以及分子量。测定蝎毒粗毒与分离所得的蝎毒五号的LD50,比较毒性;运用醋酸扭体实验和热板法评价蝎毒各组分的镇

对蝎毒镇痛有效成分进行分离纯化,筛选出具有镇痛作用的组分。

方法:

(1)分离条件的选择:应用Superdex 75凝胶层析预装柱,对样品的不同处理方法、洗脱流速、不同洗脱液以及样品浓度等分离条件进行考察,得到最佳条件。

(2)各组分分子量范围及药理作用评价:采用SDS-PAGE电泳鉴定各组分纯度以及分子量。测定蝎毒粗毒与分离所得的蝎毒五号的LD50,比较毒性;运用醋酸扭体实验和热板法评价蝎毒各组分的镇痛作用;采用移植型小鼠S180肉瘤和H22腹水瘤动物模型,观察蝎毒各组分体内抗肿瘤作用。

(3)镇痛成分安全性评价:通过进行溶血性、血管刺激性和肌肉刺激性实验评价蝎毒五号的安全性。

(4)镇痛成分镇痛作用及其机制探讨:通过醋酸扭体法、热板法和甲醛致痛法评价蝎毒五号的药理作用;通过运用纳洛酮拮抗实验,探索蝎毒五号镇痛作用与阿片受体的关系;记录大鼠坐骨神经干动作电位潜伏期、动作电位时长、去极化时间、复极化时间、负后电位时间、正后电位时间、幅度、传导速度等的变化情况,探索蝎毒五号对神经传导的影响;通过局部给药,观察小鼠对光热甩尾潜伏期的变化情况,以及由甲醛致痛引起的各时间段的疼痛反应,进一步探讨蝎毒五号的镇痛机制。

结果:

(1)蝎毒粗毒的蛋白含量为85.51%,大部分分子量集中在10-25KDa之间;凝胶过滤层析分离纯化蝎毒的最佳条件:蝎毒样品溶于缓冲液后应该立即进行低温离心,再进行分离纯化工作;进样浓度为10 mg/ml,洗脱液为0.05 M PBS缓冲液,pH=7.2;流速为1.0 ml/min。

(2) SDS-PAGE电泳显示蝎毒五号呈单一条带,分子量在10KDa~15KDa之间。蝎毒粗毒LD50为1.3561mg/kg,而蝎毒五号的LD50为4.3564mg/kg;蝎毒各组分均能减少小鼠扭体次数,提高痛阈值,其中以蝎毒5号的镇痛作用最强;蝎毒各组分对S180瘤重无明显抑制作用,亦不能延长肝癌H22荷瘤小鼠存活时间。

(3)蝎毒五号无溶血性、血管刺激性和肌肉刺激性作用。

(4)静脉注射蝎毒五号0.6mg/kg、0.3mg/kg和0.15mg/kg均能明显提高小鼠对热板法引起的痛阈值,减少醋酸扭体次数;蝎毒五号0.6mg/kg和0.3mg/kg也能显著降低小鼠对甲醛致痛的第一相和第二相反应(P0.05或P0.01)。但其镇痛作用不能完全被纳洛酮所拮抗。蝎毒五号1.112mg/ml、0.834mg/ml、0.626mg/ml、0.470mg/ml均可明显减小大鼠坐骨神经的动作电位幅度,减慢传导速度,其中蝎毒五号0.470mg/ml还可显著缩短大鼠坐骨神经动作电位时长和去极化时间(P0.05或P0.01)。在局部作用中,蝎毒五号能延长光热致小鼠甩尾反应潜伏期,降低小鼠由甲醛致痛引起的疼痛反应。结论:本实验研究表明,凝胶过滤层析分离蝎毒得到的蝎毒五号已达到电泳纯度,蝎毒五号的安全性好,中枢和外周镇痛作用均较明显,其作用机制可能部分与作用于阿片受体以及阻断神经传导有关。